體外肌肉功能測(cè)試的技巧

肌肉的外科切除和縫合

有兩種主要的方法處理感興趣的肌肉。第一種是通過手術(shù)切除肌肉，并將其放入一盤林格溶液中，然后將任何外科縫線連接到肌腱上；另一種方法是在肌腱周圍縫合，然后在直接轉(zhuǎn)移到浴室之前切斷打結(jié)的遠(yuǎn)端。

上述方法的優(yōu)點(diǎn)是可以相對(duì)快速地將肌肉從動(dòng)物體內(nèi)移除。這意味著在移除肌肉的同時(shí)不需要麻醉動(dòng)物?？梢院?jiǎn)單地對(duì)動(dòng)物通過手術(shù)切除肌肉。為了縫合肌肉的肌腱，必須將肌肉轉(zhuǎn)移到裝滿冷凍林格溶液的盤子中。

而缺點(diǎn)是需要用二氧化碳(95%O2/5%CO2)，這可能需要準(zhǔn)備一些額外的裝置來進(jìn)行灌注。此外，肌肉必須通過肌腱固定在兩端。這一步驟可能很有挑戰(zhàn)性，而且可能很難可靠地固定肌肉，使其保持在接近靜止長(zhǎng)度的位置。優(yōu)點(diǎn)則是，當(dāng)準(zhǔn)備開始實(shí)驗(yàn)時(shí)，能夠?qū)⑨樝鄬?duì)于肌肉位置放置以形成縫合環(huán)，這將使連接到系統(tǒng)上變得更加容易。在進(jìn)行初步測(cè)量后，可以確保環(huán)路始終具有正確的尺寸，以理想地適合腔室。

肌腱的替代方法（如上所示）不一定需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行麻醉。事實(shí)上，由于制作縫合結(jié)需要額外的時(shí)間，在隔離肌肉的同時(shí)麻醉動(dòng)物可能是有用的。此外，盡管肌肉將通過動(dòng)物自身的血液供應(yīng)保持活力，但暴露在外的肌肉應(yīng)定期用林格溶液沖洗，以防止其干燥。這種技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是，肌肉以正常的靜止張力固定在適當(dāng)?shù)奈恢?，一旦肌腱暴露出來，就可以更容易地打結(jié)。根據(jù)肌肉肌腱的可及性（比如膝關(guān)節(jié)處），在沒有打結(jié)滑動(dòng)的情況下切斷肌腱并將肌肉從體內(nèi)移除可能會(huì)更困難。在此步驟中要特別小心。

采用這種方法也會(huì)使準(zhǔn)備縫合環(huán)變得有點(diǎn)困難，建議在手術(shù)過程中用卡波金在組織浴中灌注林格溶液，這樣在實(shí)驗(yàn)過程中就不會(huì)出現(xiàn)肌肉活力的問題。進(jìn)行這種手術(shù)沒有對(duì)錯(cuò)之分，但在手術(shù)的每一步都應(yīng)該注意這些細(xì)微差別，以確保最佳效果。

使用“S"形掛鉤連接

將細(xì)線彎曲成S形，可以通過連接到Aurora Scientific 1200A系統(tǒng)的雙模桿的桿臂末端鉤住，而無需任何額外的粘合劑或固定。底鉤可以擰入800A的下組織夾中。它不一定需要是“S"的形狀，但如果在兩端都有一個(gè)彎曲部分，中間有一個(gè)直的部分，則可以使用該彎曲部分來幫助將鉤子更牢固地鎖定在夾子中。

為形成鉤子，建議使用0.012"的短不銹鋼絲。一旦切割好金屬絲，建議使用內(nèi)六角扳手形成彎曲，1.5或2 mm是合適的尺寸。當(dāng)鉤子固定在系統(tǒng)中的適當(dāng)位置時(shí)，將肌肉轉(zhuǎn)移到浴槽。建議先用鉗子在頂部固定，這樣重力會(huì)讓肌肉和另一個(gè)環(huán)自然下垂，而不是必須向上拉才能固定另一個(gè)。這將降低意外過度拉伸肌肉或?qū)⒔Y(jié)從肌腱中拔出的風(fēng)險(xiǎn)。

連接縫合環(huán)后，應(yīng)該升高組織浴槽，將肌肉浸入充氧林格溶液中，并在肌肉上設(shè)置一些適當(dāng)?shù)膹埩?。在施加這種靜止張力時(shí)，一定要觀察縫合結(jié)是否牢固。最終結(jié)果應(yīng)該類似于下圖。

均衡周期與優(yōu)化

在實(shí)驗(yàn)開始之前，肌肉應(yīng)該在浴槽中放一段時(shí)間，保持接近其理想的張力，以平衡其新環(huán)境。該平衡期通常為約10-15 min。平衡已經(jīng)發(fā)生的一個(gè)跡象是肌肉的靜止張力基線的穩(wěn)定。

一旦肌肉達(dá)到平衡，通過設(shè)置701C電刺激儀的超最大刺激電流來開始實(shí)驗(yàn)。建議使用恒流與恒壓模式。對(duì)于這一步，設(shè)置電流的簡(jiǎn)單方法是通過615A動(dòng)態(tài)肌肉控制和分析軟件中的InstantStim功能觸發(fā)一系列抽搐。抽搐軌跡可以通過實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)監(jiān)視器輕松可視化，一旦電流穩(wěn)定下來就可以停止調(diào)整電流。在這個(gè)電流之上增加10%作為安全系數(shù)不會(huì)傷害肌肉。

有了超分子電流組，開始拉伸肌肉，以找到其理想長(zhǎng)度Lo。由于無法輕易觀察肌肉中的肌節(jié)間距，因此確定Lo的簡(jiǎn)單方法是以循序漸進(jìn)的方式緩慢拉伸肌肉，并在每走一步后引發(fā)抽搐收縮。當(dāng)力的包絡(luò)是最大值（峰值力和基線之間的差）時(shí)，達(dá)到Lo，因此肌節(jié)間距也應(yīng)該是最佳的。為此，議使用DMC LabBook軟件中的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)窗口。一旦找到峰值，就可以開始主要的一組實(shí)驗(yàn)。注意，對(duì)于大多數(shù)肢體肌肉來說，理想的長(zhǎng)度接近松弛長(zhǎng)度，所以在這個(gè)過程中要注意不要過度拉伸肌肉。